老哥俱乐部

　　由于庚肝抗体IgM检测试剂盒保存的特殊性，使得不少的操作者对冷冻后的产品产生了疑问：ELISA检测试剂盒被冷冻后再使用有影响吗
？对此，我司ELISA检测试剂盒技术员建议ELISA试剂盒解冻后一次用完
，并作出解释
：

　　ELISA检测试剂盒的保质期一般都是在一年，如果保存得当的话，不会出现问题的
。但不要反复冻融
。当然如果是正常的ELISA试剂盒，应该放在4℃左右冰箱保存。

　　但要注意的是，如果将试剂盒刚从冰箱里面拿出来就立即使用的话，可能会影响，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。建议
：先从冰箱中拿出来
，在室温下放置20分钟以上后
，再进行测定
，以使试剂盒在ELISA检测试剂盒使用前与室温平衡。这样做的目的
，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。

　　已开封或者使用后，剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

　　庚肝抗体IgM检测试剂盒操作步骤

　　1.包被过程(注意设置空白对照

，阴性对照)
：

　　将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg)，每孔抗原加入100μl

，置37℃
，4h，或4℃，24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发，板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)。

　　2.封闭酶标反应孔
：

　　5%小牛血清置37℃封闭40min

，封闭时将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中的气泡
，封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍
，每遍3min。

　　洗涤方法
：吸干孔内反应液

，将洗涤液注满板孔
，放置2min略作摇动，吸干孔内液，倾去液体后在吸水纸上拍干
。洗涤次数3次

　　3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度)：

　　检测时一般采用1：50-1
：400的稀释度，应采用较大稀释体积进行
，一般保证样品吸取量>20μl

。

　　将稀释好的样品加入酶标反应孔中

，每样品至少加双孔，每孔100μl
，置于37℃，40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min。

　　4.加入酶标抗体：

　　酶标抗体
：根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行，37℃，30-60min之间
，短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前。

　　5.加入底物液(现用现配)：

　　选TMB-过氧化氢尿素溶液
，OPD-过氧化氢底物液系统次之
。

　　底物加入量：每孔100μl，置37℃避光放置3-5分钟
，加入终止液显色。

　　6.终止反应：

　　每孔加入终止液50μl终止反应，于20min内测定实验结果。

　　7.结果判断：

　　庚肝抗体IgM检测试剂盒OPD显色后采用492nm波长，TMB反应产物检测需要450nm波长。检测时一定要首先进行空白孔系统调零，用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示
，当P/N大于2时作为抗体的效价。(数值的大小依具体检测要求而定)