老哥俱乐部

细胞培养方法
：
1
、细胞传代
：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次

；
②加入2ml0.25%（T25瓶）
，使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后
，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化

；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀

。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基
。
3
、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次
，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后
，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞

；
④将冻存管放入程序降温盒
，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

下列是产品的订购信息：

细胞培养的优点
：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态
、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH

、温度、氧气、二氧化碳
、张力等物理化学的条件
，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理
、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下

。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞
，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化
。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术
、激光共焦显微镜、免疫组织化学
、原位杂交

、同位素标记等各种仪器设备。
​
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出
，用无菌丝绸布擦拭干净
，不要用纱布
； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时
，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃
，并经过铬酸洗液处理
； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞

，可以使用较大的培养皿，但不宜过大
，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差
，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

黑老虎根 CAS  规格
：2g 订购|咨询

5,7-二羟黄 CAS 480-40-0 规格：HPLC≥98%，20mg/vial 订购|咨询

熊果酸 CAS 77-52-1 规格：HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

络塞定 CAS 100462-37-1 规格
：10mg 订购|咨询

(-)-薄荷 CAS 10458-14-7 规格：0.2ml 订购|咨询

芝素;Sesamin CAS 607-80-7 规格：20mg 订购|咨询

一枝蒿庚素 CAS  规格
：10mg 订购|咨询

羊藿次苷I（95%） CAS  规格
：20mg 订购|咨询

胞磷钠 CAS  规格：50mg 订购|咨询

三叶豆紫檀苷 CAS 6807-83-6 规格
：20mg 订购|咨询

木通苯乙醇苷B CAS 105471-98-5 规格
：20mg 订购|咨询

Hs 683细胞
，人脑视神经胶质瘤细胞供应商离子通道蛋白Kv3.4抗体 英文名称：KCNC4 0.2ml

离子通道蛋白Kv3.3抗体 英文名称
：KCNC3/Kv3.3 0.1ml

组蛋白去甲基化酶JMJD2B抗体 英文名称：KDM4B 0.2ml

肝果糖激酶抗体 英文名称
：Ketohexokinase 0.1ml

脊柱侧后凸畸形肽酶抗体 英文名称
：KY 0.2ml

磷酸化原癌基因c-kit抗体 英文名称：Phospho-c-Kit(Ser741) 0.1ml

组蛋白乙酰转移酶PCAF抗体 英文名称：KAT2B 0.1ml

磷酸化原癌基因c-kit抗体 英文名称
：Phospho-c-Kit(Ser721) 0.1ml

离子通道蛋白Kv3.1抗体 英文名称：KCNC1 0.1ml

11抗体 英文名称：KLK11 0.1ml

k轻链抗体 英文名称

：Kappa Light Chain 0.1ml