老哥俱乐部

细胞简介：

人肺大动脉内皮分离自肺大动脉组织

；肺大动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉。肺大动脉起于右心室
，在主动脉之前向左上后方斜行，在主动脉弓下方分为左
、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左、右肺动脉
。左肺动脉较短
，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上
、下叶。右肺动脉较长而粗
，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行
，至右肺门处分为三支进入右肺上、中、下叶
。细胞呈单层多角形铺路石状分布
；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质
、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。肺大动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布
，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质
、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用

。

方法简介
：

公司实验室分离的人肺大动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人肺大动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告
：

一

、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二

、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠白介素23(IL-23)ELISA 试剂盒

People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脱氧尿三0酸(DP)检测试剂盒

HumanCalcitonin,CTELISAKit 人降钙素(CT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancarcinoembryonicaign,CEA检测试剂盒人癌胚抗原(CEA/CD66)检测试剂盒规格：96T/48T

重组腺病毒效价比色法定量检测试剂盒50次

HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)检测试剂盒规格：96T/48T

EGFR重组人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

脑源性神经营养因子(BDNF)重组蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

GABARAP重组人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 标签) Protein

CDK4 Protein Human 重组人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 标签)

NA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

脑源性神经营养因子(BDNF)重组蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

CDK4 Protein Human 重组人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 标签)

EGFR重组人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

NA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

GABARAP重组人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 标签) Protein

小鼠胃肠癌标志物CA199ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor II (BMPR- II) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)检测试剂盒

Humanornithinecarbamoylansferase,OCTELISAKit 人鸟氨基甲酰转移酶(OCT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenIerleukin3,IL-3检测试剂盒鸡白介素3(IL-3)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞IGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)检测试剂盒规格：96T/48T

人肺大动脉内皮细胞小鼠细胞外基质金属蛋白酶诱导因子/CD147   英文名称：   mouse Exacellular Maix Metalloproteinase Inducer /CD147   规格：      英文缩写：   EMMPRIN/CD147

小鼠抗可提取核抗原抗体ENA抗体   英文名称
：   Mouse Exactable Nuclear Aibody   规格：      英文缩写
：   ENA

小鼠β内啡肽   英文名称
：   Beta-Endorphin   规格：      英文缩写：   β-EP

小鼠表皮生长因子   英文名称：   epidermal growth factor-like growth factor   规格
：      英文缩写

：   EGF

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。