老哥俱乐部

细胞简介：

人肺小动脉平滑肌分离自肺小动脉组织；小动脉（smallartery）
，管径在0.3～1mm之间，小动脉包括粗细不等的几级分支

，也属肌性动脉

。较大的小动脉，内膜有明显的内弹性膜，中膜有几层平滑肌，外膜厚度与中膜相近，一般没有外弹性膜。小动脉是决定周围循环阻力大小的主要因素，也是调节微循环灌注量的“总开关"
。典型的小动脉
，其管壁的厚度与管径相比约为1∶2。中膜的肌层相对比其他动脉为厚
，当平滑肌在神经支配下强力收缩时
，其管腔可以闭塞，而使血液不能流入它所分布的毛细血管内，从而增加了周围血液循环的阻力。如果有许多小动脉同时收缩，可使血压显著上升。反之，当小动脉的平滑肌舒张时，则可使大量的血液流入毛细血管，外周阻力明显下降
，血压降低。终末小动脉（terminal arteri-ole）的口径为20～30μm；后小动脉（metar-teriole）
，又称毛细血管前小动脉（precapil-lary arteriole）的口径为12～15μm。管壁内均有较稀疏的平滑肌，在毛细血管前小动脉分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚
，叫做毛细血管前括约肌（precapillary sphinc-ter）
，其收缩或舒张，可调节真毛细血管的血流量
，是调节微循环灌注量的“分开关"。

方法简介：

公司实验室分离的人肺小动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法制备而来制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肺小动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次
；

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)检测试剂盒 ，英文名： MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit

Mouse haptoglobin / haptoglobin (Hpt/HP) ELISA Kit 小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)检测试剂盒

Mousephospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit 小鼠0酸化细胞外信号调节激酶(pERK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit人腮腺病毒IgG

同位素标记放射活性TCA检测试剂盒20次

ELISAKitAMPK大鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶

HA重组甲型流感 H9N2 (A/HongKong/1073/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide 0.5mgPAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide) 蛋白酶激活受体-2桔抗肽

VEGFA重组人 VEGF 183 / VEGF-A 蛋白 Protein

FASLG Protein Human 重组人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白

CD80 Protein Human 重组人 CD80 / B7-1 蛋白

PAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide 0.5mgPAR-2 OP(Protease-activated receptors-2 Activating Orange-peptide) 蛋白酶激活受体-2桔抗肽

FASLG Protein Human 重组人 Fas Ligand / FASLG / CD95L 蛋白

HA重组甲型流感 H9N2 (A/HongKong/1073/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CD80 Protein Human 重组人 CD80 / B7-1 蛋白

VEGFA重组人 VEGF 183 / VEGF-A 蛋白 Protein

小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human retinoblastoma tumor suppressor protein (pRB) ELISA Kit 人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)检测试剂盒

HumanleukoieneD4,LT-D4ELISAKit 人白三烯D4(LTD4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-septolysinO,ASO检测试剂盒人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物纤维素酶(cellulase)活性比色法定量检测试剂盒20次

HumanoponinⅠ，Tn-ⅠELISAKit人肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)检测试剂盒规格
：96T/48T

人肺小动脉平滑肌细胞小鼠C-肽   英文名称

：   C-peptide   规格：      英文缩写：   C-peptide

小鼠心肌肌钙蛋白   英文名称
：   cardiac oponin 1   规格
：      英文缩写：   cTn1

小鼠粒细胞集落刺激因子   英文名称
：   granulocyte colony-stimulating factor   规格：      英文缩写

：   G-CSF

小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子   英文名称：   granulocyte-macrophage colony-stimulating factor   规格：      英文缩写：   GM-CSF

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。