老哥俱乐部

细胞简介：

兔三叉神经元分离自三叉神经组织；三叉神经为粗大的混合性脑神经，含一般躯体感觉和特殊内脏运动两种纤维
。其特殊内脏运动纤维起于脑桥中段的三叉神经运动核，纤维组成三叉神经运动根，由脑桥基底部与脑桥臂交界处出脑
，位于感觉根下内侧，后进入三叉神经第3支下颌神经中，经卵圆孔出颅
，随下颌神经分支分布于咀嚼肌等
。运动根内还含有三叉神经中脑核有关的纤维
，主要传导咀嚼肌的本体感觉。三叉神经内以躯体感觉神经纤维为主，这些纤维的细胞体位于三叉神经节（半月节）内
，该神经节位于颅中窝颧骨岩部的前面三叉神经压迹处，为硬脑膜形成的美克尔腔包裹。三叉神经节由假单极神经元组成，其中枢突集中构成了粗大的三叉神经感觉根，由脑桥基底部与脑桥臂交界处入脑
，止于三叉神经诸感觉核
，其中传导痛温觉的纤维主要终止于三叉神经脊束核

；传导触觉的纤维主要终止于三叉神经脑桥核。三叉神经节细胞的周围突组成三叉神经三大分支，即第1支眼神经、第2支上颌神经
、第3支为下颌神经
。从3大分支不断分支分布于面部皮肤、眼及眶内、口腔
、鼻腔
、鼻旁窦的粘膜

、牙、脑膜等，传导痛
、温、触等多种感觉。

方法简介：

实验室分离的兔三叉神经元采用消化法结合神经元专用培养基培养
、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔三叉神经元经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）

培养基
：含B-27 Supplement、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气

，95%；CO2
，5%

兔三叉神经元体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠雌二醇受体(ER)检测试剂盒 
，英文名： ER ELISA Kit

Mouse 5 nucleotidase (5-) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶(5-)检测试剂盒

ELISA 小鼠CXCL1/KC(mouse KC)  进口分装

CLIAKitforLF/LTF(MouseLactoferrin)ELISAKIT小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白

通用型HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定性检测试剂盒20次

ELISAKitMIF巨噬细胞移动抑制因子

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (28 Ser/Trp, His 标签) Protein

rHBcAg 重组乙肝病毒核心抗原 100ugrHBcAg 重组乙肝病毒核心抗原

ULBP1重组人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

IFNA8 Protein Human 重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

GZMB Protein Human 重组人 Granzyme B / GZMB 蛋白

rHBcAg 重组乙肝病毒核心抗原 100ugrHBcAg 重组乙肝病毒核心抗原

IFNA8 Protein Human 重组人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Hong kong/213/03) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (28 Ser/Trp, His 标签) Protein

GZMB Protein Human 重组人 Granzyme B / GZMB 蛋白

ULBP1重组人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

小鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human gasin releasing peptide (GRP) ELISA Kit 人胃泌素释放多肽(GRP)检测试剂盒

Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit 人能a1A受体(ADRA1A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMR检测试剂盒人协同刺激分子受体(CMR)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织CLK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProteinkinaseA,PKAELISAKit人蛋白激酶A(PKA)检测试剂盒规格：96T/48T

兔三叉神经元细胞同型半胱酸（Hcy）测定试剂盒（酶循环法）

β-（D3-H）测定试剂盒（酶比色法）

D-二聚体（D-Dimer）测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）

转铁蛋白（F）测定试剂盒（免疫比浊法）

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。