老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置


，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔微血管周分离自微血管组织
；周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯
，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外
，周细胞还具有调控毛细血管血流量
、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物
、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量
。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素
。它还参与毛细血管直径的双向调控
；毛细血管受损时，周细胞还可增殖
，分化为内皮细胞和成纤维细胞。

方法简介：

实验室分离的兔血管周采用胶原酶-联合消化法及不锈钢网筛过滤法结合密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔微血管周经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基
：含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%

；CO2，5%

兔微血管周体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)检测试剂盒 ，英文名： PKIβ ELISA Kit

L selectin (L-Selectin/CD62L) ELISA Kit 人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂

RatIerleukin3,IL-3ELISAKIT 大鼠白介素3(IL-3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCyclin-D2(MouseCyclin-D2)ELISAKit小鼠细胞周期素D2

细胞色素P450亚酶CYP2C8(DBF)活性荧光定量检测试剂盒20次

Ratfibroblastgrowthfactor-10,FGF-10ELISAKit大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF-10)检测试剂盒规格：96T/48T

SERPINA3C重组小鼠 SerpinA3c 蛋白 Protein

CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL1抗原 0.5mgCCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL1抗原

LGALS8重组人 Galectin-8 / LGALS8 蛋白 Protein

IL17RB Protein Human 重组人 IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Flag 标签)

ALCAM Protein Rat 重组大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (Fc 标签)

CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL1抗原 0.5mgCCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL1抗原

IL17RB Protein Human 重组人 IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Flag 标签)

SERPINA3C重组小鼠 SerpinA3c 蛋白 Protein

ALCAM Protein Rat 重组大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (Fc 标签)

LGALS8重组人 Galectin-8 / LGALS8 蛋白 Protein

豚鼠免疫球蛋白E(IgE)检测试剂盒 ，英文名： IgE ELISA Kit

Human low density lipoprotein receptor related protein 6 (LRP-6) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)检测试剂盒

MonkeySolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBid(HumanBH3ieractingdomaindeathagonist)ELISAKit人BH3结构域凋亡诱导蛋白

细菌尿素琼脂平板50个

RabbitLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit兔钩端IgG(LepIgG)检测试剂盒规格：96T/48T

兔微血管周细胞三0酸腺苷酶   英文名称：   Adenosine iphosphate   规格：      英文缩写
：   ATP

血管紧张素Ⅱ一型受体抗原   英文名称：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   规格：      英文缩写：   AT1R

抗血管紧张素‖受体︱型自身抗体   英文名称
：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   规格
：      英文缩写：   AT1R-AA

血管紧张素Ⅰ   英文名称：   AngiotensinⅠ   规格
：      英文缩写
：   ANGⅠ