老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠骨分离自骨组织；骨组织的细胞成分包括骨原细胞、成骨细胞


、骨细胞和破骨细胞。只有骨细胞存在于骨组织内
，其他三种细胞均位于骨组织的边缘
。骨细胞（Osteocyte）是人体骨骼中主要的细胞成分。在成年人骨骼中，骨细胞占细胞总数量的90%～95%，大约是成骨细胞数量的20倍。骨细胞生长在骨骼内部的骨基质中
。骨细胞的细胞体呈梭形或类圆形，位于基质构成的骨陷窝内。与神经细胞类似，每个骨细胞具有大量向外延伸的突触，而这些突触均位于由骨基质构成的骨小管结构中
。通过这些突触
，骨细胞能够与骨表面的细胞、周围其它的骨细胞进行“交流"。普遍认为
，骨细胞起源于成骨细胞。在骨形成的终末阶段，成骨细胞将可能有3种不同的归宿：分化成为骨细胞
、转移至骨表面成为暂不活动的成骨细胞、进入程序死亡过程（凋亡）。骨细胞为扁椭圆形多突起的细胞，核亦扁圆
、染色深。胞质弱嗜碱性
。电镜下，胞质内有少量溶酶体、线粒体和粗面内质网
，高尔基复合体亦不发达。骨细胞夹在相邻两层骨板间或分散排列于骨板内
。相邻骨细胞的突起之间有缝隙连接
。在骨基质中，骨细胞胞体所占据的椭圆形小腔

，称为骨陷窝，其突起所在的空间称骨小管。相邻的骨陷窝借骨小管彼此通连。骨陷窝和骨小管内均含有组织液，骨细胞从中获得养分。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠骨采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠骨经骨钙素免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 属于终末分化细胞
；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

转基因植物NPTⅡ基因核酸试剂盒   48T

转基因植物Bar基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

转基因植物Bar基因核酸试剂盒   48T

转基因植物TE基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA 试剂盒

Human cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 人环0酸腺苷(cAMP)试剂盒

RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 兔内皮型合成酶(eNOS)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAP12ELISAKit大鼠apelin12

血清样品液相法去内毒素试剂盒20次

PorcineIerleukin13,IL-13ELISAKit猪白介素13(IL-13)试剂盒

CD47重组大鼠 CD47 蛋白  Protein

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 胶质纤维酸性蛋白(抗原)

STK16重组人 STK16 / PKL12 / MPSK 蛋白 (His & NusA 标签) Protein

BPI Protein Human 重组人 BPI 蛋白 (His 标签)

PLA2G1B Protein Mouse 重组小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 标签)

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein 0.5mgGFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 胶质纤维酸性蛋白(抗原)

BPI Protein Human 重组人 BPI 蛋白 (His 标签)

CD47重组大鼠 CD47 蛋白  Protein

PLA2G1B Protein Mouse 重组小鼠 PLA2G1B / Phospholipase-A2 蛋白 (His 标签)

STK16重组人 STK16 / PKL12 / MPSK 蛋白 (His & NusA 标签) Protein

小鼠骨细胞大鼠骨钙素(OT)试剂盒 ，英文名： OT ELISA Kit

Rabbit ierleukin 1 (IL-1) ELISA Kit 兔子白介素1(IL-1)试剂盒

肺链球菌(SP)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMLCK(Humanmyosinlightchainkinase)ELISAKit人肌球蛋白轻链激酶

体液基质金属蛋白酶(MMP-9)明胶法比色定量试剂盒20次

ELISAKitT犬睾同