老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠卵巢颗粒分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官
，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素
。卵巢的位置与睾丸相同
，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色
，卵巢表面密布血管
。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织
，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质

。皮质位于卵巢的周围部分
，主要由卵泡和结缔组织构成
；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管

、淋巴管和神经
。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动
、发育、排卵
、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动
。卵巢颗粒细胞是卵泡内的大细胞群，也是主要的功能细胞，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起

，尤其在卵泡发育后期，此外，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境。细胞形状呈圆形或椭圆形

。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠卵巢颗粒采用先机械分离，而后胶原酶消化，后差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠卵巢颗粒经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气

，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

性激素结合球蛋白   英文名称：   Sex Hormone Binding Globulin   规格：      英文缩写

：   SHBG

血小板衍生生长因子   英文名称：   Platelet Derived Growth Factor   规格
：      英文缩写：   PDGF

胰岛素原   英文名称

：   Proinsulin   规格
：      英文缩写
：   PINS

催乳素   英文名称：   Prolactin   规格：      英文缩写：   PRL

小鼠乙酰(ACH)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble factor related apoptosis ligand (sFASL) ELISA Kit 人可溶性凋亡相关因子配体(sFASL)试剂盒

HumanGlomerulaissueexact-advancedglycosylationendproducts,GTE-AGEELISAKit 人肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor5-HT(Human5-Hydroxyyptamine)ELISAKit人5羟色胺

饮料氨荧光定量试剂盒20次

MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAKit小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)试剂盒规格：96T/48T

ERBB2重组人 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 标签) Protein

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶1(NOX1)重组蛋白 Recombinant Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1 (NOX1)

KIAA1279重组人 KIAA1279 蛋白 Protein

CCNE1 Protein Human 重组人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白

NA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸氧化酶1(NOX1)重组蛋白 Recombinant Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1 (NOX1)

CCNE1 Protein Human 重组人 CCNE1 / Cyclin-E1 蛋白

ERBB2重组人 HER2 / ErbB2 蛋白 (Fc 标签) Protein

NA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

KIAA1279重组人 KIAA1279 蛋白 Protein

小鼠卵巢颗粒细胞大鼠干扰素诱导蛋白11(IP-11/CXCL11)试剂盒
，英文名： IP-11/CXCL11 ELISA Kit

Porcine ierleukin 3 (IL-3) ELISA Kit 猪白介素3(IL-3)试剂盒

超级细菌NDM-1基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMEC/CCL28(Humanmucosaeassociatedepitheliachemokine)ELISAKit人粘膜相关上皮趋化因子

体液葡萄糖氧化酶比色法定量试剂盒20次

ELISAKitsIgA牛分泌型免疫球蛋白A

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。