老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基


，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠毛囊干分离自皮肤毛囊组织；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈

，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔
。毛囊位于真皮和皮下组织中，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度
，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织
。毛囊干细胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一种细胞
。毛囊干细胞属于成体干细胞
，在体内处于静止状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力
。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮

、毛囊
、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。毛囊干细胞和其它成体干细胞一样，具有慢周期性、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞(hair follicle stem cells
，FSC)、短暂增殖细胞(transit amplifying cells

，TAC)有丝分裂后分化细胞(postmitotic differentiating cells，PDC)三个阶段
。毛囊干细胞在光镜下呈立方形，细胞体积小，核浆比率大

，表面光滑
，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞
，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关

。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛，细胞核存在许多卷曲，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性。

方法简介：

实验室分离的小鼠毛囊干采用胶原酶 - 联合消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的小鼠毛囊干经CD34免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基
：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：梭形、多角形

传代特性：可传3代左右

消化液

：0.25%

培养条件
：气相：空气
，95%
；CO2，5%

小鼠毛囊干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

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：6个月。

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。

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HumanUlasensitivityi-iodothyronine，u-T3ELISAKit人高敏三甲状腺原(u-T3)试剂盒规格：96T/48T

EFNB1重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

H5N1-H5 H5亚型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亚型全病毒

RPS6KA2重组人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 标签) Protein

EZR Protein Human 重组人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

H5N1-H5 H5亚型全病毒 1mgH5N1-H5 H5亚型全病毒

EZR Protein Human 重组人 EZR / VIL2 / Ezrin 蛋白

EFNB1重组大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

EPHB1 Protein Mouse 重组小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白

RPS6KA2重组人 RSK3 / RPS6KA2 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠毛囊干细胞大鼠肝素蛋白聚糖(HSPG)试剂盒 
，英文名： HSPG ELISA Kit

Mouse insulin aoaibodies (IAA) ELISA Kit 小鼠胰岛素自身抗体(IAA)试剂盒

Ratmalondialchehyche,MDAELISAKit 大鼠二(MDA)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforG-CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor)ELISAKit人粒细胞集落刺激因子

细胞谷同酸转氨酶(GPT)活性光谱法定量试剂盒20次

Raudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit大鼠的牛血清白蛋白残留检测试剂盒规格：96T/48T