老哥俱乐部

细胞简介：

猪成骨分离自颅骨组织
；颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外
，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结
，起着保护和支持脑
、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用
。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔
，容纳脑，共8块。面颅为颅的前下部分
，包含眶、鼻腔、口腔等结构
，构成面部的支架

，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化
。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域
，分泌酸性物质溶解矿物质
，分泌蛋白酶消化骨基质
，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位
，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨
；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键
。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础
，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。

方法简介
：

公司实验室分离的猪成骨采用先用短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的猪成骨经ALP染色检测
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%

；CO2
，5%

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min


；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠5-羟色胺转运体(5-HTT/SE)检测试剂盒 ，英文名： 5-HTT/SE ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 4 (MMP-4) ELISA Kit 小鼠基质金属蛋白酶4(MMP-4)检测试剂盒

Mouseα-glathioneS-ansferases,α-GSTELISAKit 小鼠αS转移酶(α-GST)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanscavengerreceptorB,SRBELISAKit人清道夫受体B

通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒10/20次

ELISAKitGelsolin大鼠凝溶胶蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PACAP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体(抗原)

CSH1重组人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

EDEM2 Protein Human 重组人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

C5 Protein Human 重组人 Complement C5a 蛋白

PACAP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸环化酶激活肽受体(抗原)

EDEM2 Protein Human 重组人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

C5 Protein Human 重组人 Complement C5a 蛋白

CSH1重组人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

小鼠巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human lactate dehydrogenase (LDH) ELISA Kit 人乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒

HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit 人成骨生长肽(OGP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-Bburgdorleriaibody,BB-Ab检测试剂盒人抗BB抗体(BB-Ab)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物过氧化氢(HYDROGENPEROXIDE)活性荧光定量检测试剂盒20次

Humanα-Synuclein,α-SYNELISAKit人α突触核蛋白(α-SYN)检测试剂盒规格：96T/48T

猪成骨细胞小鼠多巴胺D1受体(D1R)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠多巴胺(DA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠对基苯(PABA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠端粒酶(TE)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。