老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠胚肝间充质干分离自胚胎肝组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官

，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用
；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置
，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方
，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官
。肝脏是尿素合成的主要器官
，又是新陈代谢的重要器官
。间充质干细胞（MSC）是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。在不同的诱导条件下
，可分化为多种造血细胞以外的组织细胞，并具有造血支持
、免疫调节、组织修复等作用。间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，存在于骨髓
、脂肪组织
、脐血及多种胎儿组织
。它可分泌多种细胞因子及生长因子

，促进造血干细胞（HSC）的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节
、抗炎和组织修复作用，可减轻移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相关并发症
。胚胎肝非实质细胞中含有MSC
，且量较大，可成为种子细胞。

方法简介
：

实验室分离的小鼠胚肝间充质干采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠胚肝间充质干经CD44免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、EGF
、bFGF、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件
：气相
：空气，95%；CO2
，5%

小鼠胚肝间充质干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠内皮素转化酶1(ECE1)检测试剂盒 ，英文名
： ECE1 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor soluble receptor alpha (PDGFsR- alpha) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)检测试剂盒

Ratthyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit 大鼠抗促甲状腺素受体抗体(Ab)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGlp-1ELISAKit大鼠胰高血糖素样肽1

细胞脯(proline)含量比色法定量检测试剂盒20次

Ratsolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKit大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sAIL)检测试剂盒规格
：96T/48T

COLEC12重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

CXCL10 Protein Human 重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

OMG Protein Mouse 重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签)

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

CXCL10 Protein Human 重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

COLEC12重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

OMG Protein Mouse 重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签)

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

小鼠卵巢癌标志物CA125ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucose oxidase (GOD) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶(GOD)检测试剂盒

HumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit 人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanactivatedproteinCresistance,APCR检测试剂盒人活化蛋白C抵抗素(APCR)检测试剂盒规格：96T/48T

脂质过氧化物4-羟基壬烯酸(4-HNE)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20次

MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit小鼠血管紧张素转化酶(ACE)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠胚肝间充质干细胞小鼠巨噬细胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。