老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠胚胎成纤维分离自胚胎

；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大
，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性

，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形

、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形
，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞
，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性
，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠胚胎成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠胚胎成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样

脱氢酶测试盒   紫外分光光度法   50管/48样

还原糖含量测试盒   可见分光光度法   50管/24样

纤维素酶（CL）测试盒   可见分光光度法   50管/24样

豚鼠免疫球蛋白G2(IgG2)试剂盒 ，英文名： IgG2 ELISA Kit

Human granulysin (histatin 5) ELISA Kit 人富组蛋白(histatin 5)试剂盒

rabbitImmunoglobulinG,IgGELISAKit 兔子免疫球蛋白G(IgG)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBAFF-R(HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor)ELISAKit人B细胞活化因子受体

线虫补骨脂素(4-imethylpsoralen)诱导突变试剂盒10次

Rabbitcatecholamine,CAELISAKit兔儿茶酚胺(CA)试剂盒规格
：96T/48T

IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白

HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白

IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein

HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠胚胎成纤维细胞大鼠钙调素(CAM)试剂盒 ，英文名： CAM ELISA Kit

Lester pig mononucleosis septozotocin (listeriolysin) ELISA Kit 猪单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)试剂盒

转基因植物NPTⅡ基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMCP-2/CCL8(Humanmonocytechemotacticprotein2)ELISAkit人单核细胞趋化蛋白2

体液腺苷酸环化酶(AdenylateCyclase)活性荧光定量试剂盒20次

ELISAKitIFN-α猫α干扰素